Η επαλήθευση της γνησιότητας των προϊόντων διατροφής είναι απαραίτητη λόγω της πρόσφατης αύξησης των παραποιημένων προϊόντων που περιέχουν κρέας. Οι υπάρχουσες μέθοδοι ανίχνευσης έχουν μια σειρά από μειονεκτήματα, όπως δοκιμές σε εξειδικευμένα εργαστήρια με ακριβό εξοπλισμό. Ως αποτέλεσμα, το κόστος των δοκιμών αυξάνεται όπως και ο χρόνος λήψης των αποτελεσμάτων. Συνεπώς υπάρχει ανάγκη να αναπτυχθούν εναλλακτικές, ταχύτερες και πιο προσιτές, ιδιαίτερα ευαίσθητες μέθοδοι για την ανίχνευση νοθείας.
Επιστήμονες από το Ερευνητικό Κέντρο Βιοτεχνολογίας RAS της Μόσχας, ανέπτυξαν μια προσέγγιση που βοηθά στον ακριβή εντοπισμό του κρέατος χοίρου και κοτόπουλου σε ωμά και επεξεργασμένα προϊόντα σε πολύ σύντομο χρόνο.
«Προτείναμε μια απλή μέθοδο προσδιορισμού των συστατικών των αλλαντικών και άλλων προϊόντων που περιέχουν κρέας. Η ανάπτυξή μας βοηθά στον εντοπισμό κρέατος κοτόπουλου και χοιρινού κρέατος σε δείγματα, γρήγορα και χωρίς τη χρήση περιττών συσκευών », λέει ο Anatoly Zherdev, επικεφαλής του έργου RSF. Ο Anatoly Zherdev είναι Ph.D. στη Βιολογία και κορυφαίος ερευνητής του Εργαστηρίου Ανοσοβιοχημείας του Ερευνητικού Κέντρου Βιοτεχνολογίας RAS της Μόσχας.
Αρχικά, οι συγγραφείς απομόνωσαν DNA από τα δείγματα, πρόσθεσαν βραχείες αλυσίδες εκκινητών νουκλεοτιδίων με ετικέτες (βιοτίνη και φλουορεσκεΐνη) και αντιδραστήρια ενίσχυσης πολυμεράσης ανασυνδυασμού. Αυτή η διαδικασία πραγματοποιείται σε σταθερή θερμοκρασία, χωρίς ειδικά όργανα για πιο σύνθετες ενισχύσεις. Ως αποτέλεσμα, σε μόλις 15 λεπτά, ο αριθμός των αντιγράφων του θραύσματος DNA που δεσμεύεται από δύο εκκινητές αυξάνεται δραματικά. Σε αυτή την εξέλιξη, το γονίδιο για μια από τις μιτοχονδριακές πρωτεΐνες ενός κοτόπουλου και ενός χοίρου χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία του DNA που θα ανιχνευθεί. Το προκύπτον διάλυμα διοχετεύθηκε σε δοκιμαστικές ταινίες με μόρια στρεπταβιδίνης που μπορούν να δεσμεύσουν επιλεκτικά τη βιοτίνη στη ζώνη ανίχνευσης. Σαν αποτέλεσμα, το απαραίτητο DNA προσαρτήθηκε στην ταινία. Μετά από αυτό, οι επιστήμονες πρόσθεσαν νανοσωματίδια χρυσού με ακινητοποιημένα αντισώματα στη φλουορεσκεΐνη – μετά τη δέσμευση των νανοσωματιδίων, εμφανίστηκε το χρώμα στη δοκιμαστική ταινία. Ένα τέτοιο πολυστρωματικό “σάντουιτς” μειώνει τους κινδύνους λανθασμένων αποτελεσμάτων και αυξάνει την αξιοπιστία της δοκιμής.
Οι βιοχημικοί δοκίμασαν αυτό το σύστημα σε δείγματα που παρέχονται από συνεργάτες από το Ομοσπονδιακό Ερευνητικό Κέντρο VM Gorbatov για Συστήματα Τροφίμων RAS: κιμάς με διαφορετική περιεκτικότητα σε κοτόπουλο, χοιρινό και βοδινό, καθώς και προϊόντα μαγειρεμένου κρέατος που παρασκευάζονται σύμφωνα με τα κυβερνητικά πρότυπα. Οι επιστήμονες συνέκριναν δύο παραλλαγές εξαγωγής DNA: τυπική, μακροπρόθεσμη και ταχεία. Με τη μείωση του χρόνου προετοιμασίας του δείγματος, η φωτεινότητα του χρωματισμού της δοκιμαστικής ταινίας μειώθηκε ελαφρά. Ωστόσο, τρία λεπτά ήταν ήδη αρκετά για να ανιχνευθούν αξιόπιστα οι αλλαγές χρώματος στην περιοχή ανίχνευσης και να βγει ένα συμπέρασμα σχετικά με τη νοθεία — εάν υπήρχε περίπτωση προσθήκης κοτόπουλου ή χοιρινού ενώ δεν έπρεπε να είναι σύμφωνα με τη συνταγή.
Σε αυτή την εργασία, χρησιμοποιήθηκαν μόνο οι εκκινητές φλουορεσκεΐνη και βιοτίνη. Η εφαρμογή ακατέργαστης εκχύλισης στο πρωτόκολλο RPA-LFA μείωσε την ευαισθησία της ανάλυσης και μείωσε τον χρόνο προετοιμασίας του δείγματος στα 3 λεπτά. Ως εκ τούτου, όχι μόνο αναπτύχθηκε μια δοκιμή RPA-LFA, αλλά προτάθηκε επίσης μια τεχνική ταχείας πλήρους κύκλου 33 λεπτών για τον έλεγχο της νοθείας κρέατος. Αυτή η τεχνική θα μπορούσε να εφαρμοστεί σε επεξεργασμένα προϊόντα κρέατος ή κρέας μετά τη θέρμανση. Οι προτεινόμενες λύσεις θα είναι χρήσιμες για την ανάπτυξη νέων ταχέων εργαλείων για την αναγνώριση των συστατικών του κρέατος ακόμη και σε ίχνη.
” Όλα τα στάδια της ανάλυσής μας διαρκούν μόνο 33 λεπτά. Είναι η ταχύτερη μέθοδος για την ανίχνευση προσθέτων κοτόπουλου και χοιρινού σε προϊόντα κρέατος. Δεν απαιτεί εξελιγμένο εξοπλισμό ή ακριβά αντιδραστήρια. Ελπίζουμε ότι η προσέγγισή μας θα βοηθήσει στην παροχή ποιοτικών προϊόντων στους καταναλωτές και προστατέψτε τους από αδίστακτους παραγωγούς », λέει ο Anatoly Zherdev.
Για να διαβάσετε ολόκληρη τη μελέτη πατήστε ΕΔΩ
Πηγή: EurekAlert – mdpi
Ακολουθήστε το Cibum 
