cibum team
Οι τοξίνες T-2 και HT-2 είναι δευτερογενείς μεταβολίτες των ειδών Fusarium. Αυτά τα μόρια μπορούν να έχουν υψηλές πιθανές τοξικές επιδράσεις στην υγεία των ανθρώπων και των ζώων. Στην μελέτη που διενήργησε το Τμήμα Χημείας του Ιταλικού Πανεποστημίου Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Puglia e della Basilicata, οι μέθοδοι ELISA και Υγρή Χρωματογραφία εξαιρετικής απόδοσης με ανίχνευση φθορισμού (UPLC/FLD) εφαρμόστηκαν και επικυρώθηκαν ως δοκιμές διαλογής και επιβεβαίωσης για τον εντοπισμό αυτών των δύο τοξινών σε δείγματα δημητριακών. Οι μέθοδοι που αναπτύχθηκαν δοκιμάστηκαν με ανάλυση 100 δειγμάτων σιτηρών με διαλογή ELISA για μείωση κόστους και χρόνου ανάλυσης και στη συνέχεια με χρήση UPLC/FLD για σκοπούς επιβεβαίωσης. Και οι δύο μέθοδοι πληρούσαν τα κριτήρια απόδοσης για ευαισθησία, γραμμικότητα, επιλεκτικότητα, ακρίβεια και ανθεκτικότητα, όπως αναφέρεται στην Ευρωπαϊκή Απόφαση αριθ. 2002/657/ΕΚ και στον Κανονισμό (ΕΚ) αριθ. 401/2006.
Η συσχέτιση μεταξύ των προσεγγίσεων ELISA και UPLC/FLD έδειξε καλά αποτελέσματα ( r = 0,9056), επιβεβαιώνοντας ότι αυτές οι δύο τεχνικές θα πρέπει να θεωρούνται συμπληρωματικές στις επίσημες δραστηριότητες ελέγχου των δημητριακών και των παράγωγων προϊόντων.
Η τοξίνη T-2 και η τοξίνη HT-2 ανήκουν στην ομάδα των μολυσματικών ουσιών γνωστών ως τριχοθεκένια, τα οποία αποτελούν μέρος της μεγαλύτερης ομάδας Fusarium μυκοτοξίνες, που περιλαμβάνουν περισσότερες από 150 ενώσεις. Οι δομές των τοξινών Τ-2 και ΗΤ-2 διαφέρουν μόνο σε μία λειτουργική ομάδα. Η τοξίνη Τ-2 ακετυλιώνεται στο C-4, ενώ η τοξίνη ΗΤ-2 δεν είναι ακετυλιωμένη. Η τοξίνη Τ-2 μετατρέπεται εύκολα σε ΗΤ-2 με μεταβολισμό χωρίς να χάνεται η τοξικότητά της. Επομένως, το T-2 και το HT-2 συνήθως αξιολογούνται μαζί.
Το 2011, η Ευρωπαϊκή Αρχή για την Ασφάλεια των Τροφίμων (EFSA) δημοσίευσε μια επιστημονική γνώμη σχετικά με τους κινδύνους για την υγεία των ανθρώπων και των ζώων που σχετίζονται με την παρουσία των τοξινών Τ-2 και ΗΤ-2 στα τρόφιμα και τις ζωοτροφές. Σε αυτή τη γνώμη, η επιτροπή της EFSA για τους μολυσματικούς παράγοντες στην τροφική αλυσίδα κατέληξε στο συμπέρασμα ότι το T-2 είναι καρκινογόνο, μεταλλαξιογόνο και ανοσοκατασταλτικό. Μέχρι στιγμής, δεν έχουν καθοριστεί νομικά όρια στην Ευρώπη για τις μυκοτοξίνες T-2/HT-2 και υπάρχει μόνο μια σύσταση (Σύσταση 2013/165/ΕΕ). Ωστόσο, η σύσταση ζητά από τα κράτη μέλη να παρακολουθούν την παρουσία τόσο του Τ-2 όσο και του ΗΤ-2 στα τρόφιμα και τις ζωοτροφές. Αυτό σημαίνει ότι, στο εγγύς μέλλον, τα εργαστήρια που είναι επιφορτισμένα με τις επιθεωρήσεις τροφίμων θα χρειαστούν γρήγορα και αξιόπιστα αναλυτικά εργαλεία για την ανάλυση μεγάλου αριθμού δειγμάτων σε σύντομο χρονικό διάστημα. Οι κύριες αναλυτικές μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της τοξίνης T-2 και HT-2 σε κόκκους δημητριακών είναι χρωματογραφικές μέθοδοι-κυρίως αέρια χρωματογραφία σε συνδυασμό με ανίχνευση ιονισμού φλόγας (FID), ανίχνευση ηλεκτρονίων (ECD) και ανίχνευση φασματομετρίας μάζας (MS). Επιπλέον, υγρή χρωματογραφία σε συνδυασμό με φασματοφθορομετρική ανίχνευση ή φασματομετρία μάζας έχει υποδειχθεί για ανάλυση Τ-2 και ΗΤ-2 . Έχει ήδη δημοσιευτεί μια ευαίσθητη μέθοδος HPLC για την ανάλυση της τοξίνης Τ-2 σε δημητριακά. Αυτή η μέθοδος περιλαμβάνει έναν καθαρισμό στήλης ανοσοσυγγένειας (IAC) μετά την εκχύλιση και ένα βήμα παραγωγοποίησης με 1-ανθροϋλνιτρίλιο και 4-διμεθυλαμινοπυριδίνη πριν από την ανίχνευση φθορισμού. Ωστόσο, η προσέγγιση ELISA χρησιμοποιείται περισσότερο λόγω της απλότητας και της ταχύτητάς της.
Όσον αφορά τις επιδόσεις αναλυτικών μεθόδων για την έρευνα υπολειμμάτων φαρμάκων και περιβαλλοντικών μολυντών στα τρόφιμα, η ευρωπαϊκή νομοθεσία απαιτεί την επικύρωση τόσο των μεθόδων διαλογής όσο και των επιβεβαιωτικών μεθόδων, σύμφωνα με την Ευρωπαϊκή Απόφαση αριθ. 2002/657/ΕΚ. Η απόφαση αυτή καθορίζει έναν κατάλογο των ορισμών και των απαιτήσεων που πρέπει να πληρούνται μέσω της διαδικασίας επικύρωσης.
Σκοπός της εργασίας του Ιταλικού τμήματος Χημείας ήταν να επικυρωθεί και στη συνέχεια να συγκριθεί η ELISA, ως μέθοδος διαλογής, και η UPLC/FLD, ως μέθοδος επιβεβαίωσης, για τον ποσοτικό προσδιορισμό των T-2 και HT- 2 τοξίνες στα δημητριακά. Η σύγκριση πραγματοποιήθηκε λαμβάνοντας υπόψη τόσο τις παραμέτρους επικύρωσης που ελήφθησαν (επιλεκτικότητα, ακρίβεια, ανάκτηση, ευρωστία και αβεβαιότητα μέτρησης) όσο και τα αποτελέσματα που προέκυψαν από την ανάλυση πραγματικών δειγμάτων.
Σε αυτή τη μελέτη, οι δύο αναλυτικές μέθοδοι βασισμένες σε ELISA και UPLC/FLD επικυρώθηκαν πλήρως και στη συνέχεια συγκρίθηκαν με βάση τις παραμέτρους επικύρωσης και τα αποτελέσματα που προέκυψαν από την ανάλυση 100 δειγμάτων ζωοτροφών.
Η μελέτη επιβεβαίωσε ότι το ELISA και το UPLC/FLD θα πρέπει να θεωρούνται συμπληρωματικά στους επίσημους ελέγχους, ειδικά όταν ένα εργαστήριο χρειάζεται να αναλύσει μεγάλες ποσότητες δειγμάτων με υψηλό επίπεδο αξιοπιστίας σε σύντομο χρονικό διάστημα. Τα δείγματα θα πρέπει να “ελέγχονται” χρησιμοποιώντας ELISA και όλα τα δείγματα με συγκεντρώσεις υψηλότερες από το όριο ανίχνευσης πρέπει να επιβεβαιώνονται από το UPLC/FLD.
Για να διαβάσετε ολόκληρη τη μελέτη πατήστε ΕΔΩ https://www.mdpi.com/2076-3417/11/4/1688/htm
Ακολουθήστε το Cibum 
